動(dòng)態(tài)光散射(DLS)是一種用于測(cè)量樣品中顆粒大小的技術(shù)。它的工作原理是將激光照射通過(guò)樣品,并測(cè)量散射光強(qiáng)度作為角度的函數(shù)。散射光的強(qiáng)度與樣品中顆粒的大小有關(guān)。DLS可用于測(cè)量從納米到微米的各種尺寸的顆粒的尺寸。它是表征樣品中顆粒尺寸分布的有力工具。
之所以稱(chēng)為“動(dòng)態(tài)”是因?yàn)闃悠分械姆肿硬煌5刈霾祭蔬\(yùn)動(dòng),正是這種運(yùn)動(dòng)使散射光產(chǎn)生多普勒頻移。動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)的工作原理可以簡(jiǎn)述為以下幾個(gè)步驟:首先根據(jù)散射光的變化,即多普勒頻移測(cè)得溶液中分子的擴(kuò)散系數(shù)D,再由D=KT/6πηr可求出分子的流體動(dòng)力學(xué)半徑r,(式中K為玻爾茲曼常數(shù),T為絕對(duì)溫度,η為溶液的粘滯系數(shù)),根據(jù)已有的分子半徑-分子量模型,就可以算出分子量的大小。
光在傳播時(shí)若碰到顆粒,一部分光會(huì)被吸收,一部分會(huì)被散射掉。如果分子靜止不動(dòng),散射光發(fā)生彈性散射時(shí),能量頻率均不變。但由于分子不停地在做雜亂無(wú)章的布朗運(yùn)動(dòng),所以,當(dāng)產(chǎn)生散射光的分子朝向監(jiān)測(cè)器運(yùn)動(dòng)時(shí),相當(dāng)于把散射的光子往監(jiān)測(cè)器送了一段距離,使光子較分子靜止時(shí)產(chǎn)生的散射光要早到達(dá)監(jiān)測(cè)器,也就是在監(jiān)測(cè)器看來(lái)散射光的頻率增高了;如果產(chǎn)生散射的分子逆向監(jiān)測(cè)器運(yùn)動(dòng),相當(dāng)于把散射光子往遠(yuǎn)離監(jiān)測(cè)器的方向拉了一把,結(jié)果使散射光的頻率降低。日常生活中,但我們聽(tīng)到救護(hù)車(chē)由遠(yuǎn)而近時(shí),聲音的頻率越來(lái)越高,也是同樣的道理。實(shí)際上我們可以根據(jù)聲音頻率變化的快慢來(lái)判斷救護(hù)車(chē)運(yùn)動(dòng)的速度。
光散射技術(shù)就是根據(jù)這種微小的頻率變化來(lái)測(cè)量溶液中分子的擴(kuò)散速度。由D=KT/6πηr可知,當(dāng)擴(kuò)散速度一定時(shí),由于實(shí)驗(yàn)時(shí)溶劑一定,溫度是確定的,所以擴(kuò)散的快慢只與流體動(dòng)力學(xué)半徑有關(guān)。蛋白質(zhì)多方面的性質(zhì)都直接和它的大小相關(guān)。因此,光散射廣泛應(yīng)用與蛋白質(zhì)及其它大分子的理化性質(zhì)研究。